返回上一页

细胞转染效率及活率分析

Countstar® FL细胞分析仪可快速、准确检测细胞转染效率。由于后续的实验准确度非常强烈的依赖于转染率结果的准确性,实验室常用荧光显微镜或流式细胞仪测定转染效率。但是荧光显微镜没有分析软件且依赖于人眼计数会带来主观误差,流式细胞仪需要经过复杂的仪器学习和操作。Countstar® FL为实验室带来了快速、准确并且简便的转染效率测定方法。

Countstar® FL成像细胞分析仪对细胞成像,根据每个细胞的图像获得荧光强度、面积、直径、圆度等形态信息,对这些数据加以分析,能够像传统流式细胞仪那样进行群体分析。因为每个细胞的图像与参数值是相互关联的,如果有必要,可以对群体分析中特定的细胞进行图像观察与数值确认。(图1)

 

图1:细胞图像与数据的关联,可以浏览每一个单个细胞的图像以及其对应的数据

本例使用成像细胞分析仪Countstar® FL对悬浮细胞进行细胞转染分析。以前多使用流式细胞仪分析细胞转染,Countstar® FL不仅能够进行群体分析,而且能够结合细胞图像进行结果的验证。

Countstar® FL拍照与分析:1.选择GFP/PI双色通道进行实验;2.每个样品获取3个视野的图片;3.导出FCS文件进行结果分析;

293细胞转染效率优化确定:如下图(图1)所示,开展了一个二维交叉实验,转染试剂的量从0µl至9µl,质粒的量从0.25µg至1µg

图1: 12孔板293细胞转染条件图示

不同转染条件的细胞用Countstar®FL拍照,拍摄的图像如图2、3所示,图3显示了用软件识别细胞的结果,根据明场的的细胞特征来识别细胞。杂质及细胞碎片会被排除在外(图3中的Δ标记),所以明场特定参数可以排除指定特征的对象。PI染色可以区分死活细胞,如图3所示,在测定转染效率的同时,可以快速测定细胞的活率。

图2:细胞转染拍摄图片结果

图3:图像识别软件进行图像识别前后

Countstar®FL可以导出类流式分析格式的文件,用FCS express可以快速进行类流式分析。绘图的结果如图4所示,横坐标轴表示GFP荧光强度,纵坐标表示细胞数目。图5的饼图表面转染效率的比例。图4和图5说明,随着转染试剂与质粒的增加,转染效率增高。当转染试剂达到9微升时,转染效率反而下降。

 

 

Countstar®FL在测定细胞转染效率的同时,可以快速测定细胞的活率,用以评估转染条件对细胞的毒性作用。图7显示,随着转染试剂的增加,细胞活率逐渐下降。综合评估转染效率,需要考虑细胞活率这部分因素,用细胞活率乘以细胞转染效率,可以得到一个综合的评估结果(如图8所示),结果显示在转染试剂为6微升,质粒为1微克时,可得到最高的转染效率。

           

       

                                            


更多产品应用

明场细胞分析应用案例

荧光细胞分析应用案例

细胞计数

肿瘤细胞研究中浓度与活率等细胞参数检测案例

细胞活率

荧光法检测细胞活率
Countstar细胞计数仪与传统计数法对比详解 直接检测PBMC浓度及细胞活率
免疫细胞计数分析案例
酵母细胞计数分析案例

CD marker

细胞亚群分析——CD marker检测
藻类细胞计数仪藻类细胞检测案例

细胞周期

荧光检测细胞周期
原代细胞浓度及活率检测案例 Countstar® FL在细胞周期定量分析中的应用
干细胞活率及浓度检测案例

细胞凋亡

细胞凋亡检测
Countstar细胞计数仪计数真菌孢子

细胞毒性

Countstar® FL在细胞毒性实验中的应用

细胞聚团

聚团率以及细胞聚团校准计数案例

抗体亲和力

Countstar® FL在抗体亲和力实验中的应用
昆虫聚团细胞校准计数案例  

细胞大小

细胞直径大小形态分析案例

生长曲线

细胞生长曲线分析案例


 



沪ICP备13047873-1号